作為制備靶向治療藥物的一種方法，克隆細胞系的發(fā)展已經(jīng)越來越受到重視和投入，然而面對單細胞克隆日益增長的實驗需求， 目前常用的實現(xiàn)方法都不盡如人意。 通過有限稀釋和顯微鏡操作，或利用像流式細胞儀這類的自動化設(shè)備進行細胞的篩選和分離，數(shù)量少且非常耗費時間和精力，缺少克隆性的依據(jù)，細胞存活率低，不能有效處理小批量樣本，且具有較高的交叉污染風險。這些設(shè)備的采購和運營成本較高，但卻缺乏證實克隆來自單細胞的證明。

德國cytena公司開發(fā)的單細胞打印機（CloneSelect SCP）則有效解決了這一問題。這款產(chǎn)品技術(shù)將細胞檢測傳感器和按需滴定印刷技術(shù)相結(jié)合。過程類似于傳統(tǒng)的噴墨打印機。通過在細胞輕輕的沉積在孔板之前篩選出單個細胞和細胞形態(tài)，確保細胞的活力；使用無菌的，一次性的打印墨盒避免了交叉污染；在沉積的過程中，提供單細胞的圖像，為用戶提供了他們的細胞系是來自于單克隆的證據(jù)，符合FDA對單抗的生產(chǎn)需證實來自于單個細胞的要求，大大提升藥品的開發(fā)進程。

Cytena開發(fā)的克隆篩選單細胞打印機是臺式的自動化的實驗室設(shè)備，由于軟件采用直觀，友好的界面設(shè)計，所以無需特別的經(jīng)驗，實驗室的任何成員都可以進行操作 ，設(shè)備的操作設(shè)置簡單快速，分離一塊含單細胞的96孔板只需幾分鐘時間。

克隆篩選單細胞打印機工作原理：

SCP技術(shù)基于頂端的透明微型分配芯片，用于從細胞懸浮中按需生成微滴。分配器芯片是一個包含微流體結(jié)構(gòu)的硅玻璃化合物，被稱為劑量室的背面有一個硅膜（圖b），它被一個壓電板制動器所擠壓偏轉(zhuǎn)，這種擠壓偏轉(zhuǎn)導(dǎo)致腔體內(nèi)的液體位移，液滴從噴嘴噴出來。根據(jù)流體的物理性質(zhì)和壓電控制參數(shù)，可以使用直徑為40μm的噴嘴，將液滴體積控制在100 pL至250 pL的范圍內(nèi)。

芯片連接到儲存器，可以裝載體積為5至100μL的細胞懸浮液。通過簡單的手動上樣法將細胞懸浮液裝載到容器中來，芯片通過毛細管力自我填充，因此可以在樣品加載后直接打印。

技術(shù)亮點：

單細胞的證據(jù)可追溯性

在cartridge分離細胞前后的過程中，會連續(xù)拍取多張細胞圖片，證實克隆來自于單個細胞。這些圖片會根據(jù)孔板的位置進行命名，并存儲在硬盤中，以便追蹤。

單細胞打印效率高，且適用于多個細胞系

CloneSelect SCP打印效率普遍高于96%,有的細胞甚至達到100。分離快速，一個96孔板只需2-3min，且每個孔都有多張圖片證實為單細胞，該技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于在多種細胞的單細胞分離如CHO, HEK,Hela，L929，U2OS等。

細胞無損傷，單細胞存活率高

細胞無需標記染色，沒有激光損傷，沒有電壓的影響，直接采用 catridge進行分離，所以細胞沒有任何損傷，分離后的細胞存活率高，克隆恢復(fù)率高。

應(yīng)用領(lǐng)域

• 單克隆篩選

• 單細胞基因組學(xué)

• 單細胞PCR

• 稀有細胞的分離

應(yīng)用案例

克隆細胞系開發(fā)在單抗領(lǐng)域是一個至關(guān)重要的環(huán)節(jié)?，F(xiàn)有的細胞系開發(fā)流程存在很多弊端如缺乏單克隆證據(jù)，單細胞分離效率低下，單細胞存活率低等。

SCP技術(shù)不僅能快速有效的分離單細胞，還能提供單克隆來源的證據(jù)，且保證細胞高的存活率以及0風險的交叉污染。單細胞打印機SCP支持96孔和384孔板,已經(jīng)成功應(yīng)用于一系列典型的細胞系如CHO, U2OS，HEK293, L929，Hela細胞等。

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